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微生物检验菌落总数计算方法 菌落总数的测定

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微生物检验菌落总数计算方法 菌落总数的测定

菌落总数测定采用什么方法,其原理是什么

取一定量的液体样品(固体需均质取悬液),一般是1ml,无菌操作置于培养基平皿内,倾注灭菌后冷却至45摄氏度的营养琼脂,待培养基冷却凝固后翻转平皿并进行培养。

通过培养,接种的细菌不断分裂繁殖,可形成肉眼可见的菌落,对这些菌落进行计数,即为菌落总数测定。

菌落总数的检验方法

菌落总数的测定,一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液,然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合,在一定温度下,培养一定时间后(一般为48小时),记录每个平皿中形成的菌落数量,依据稀释倍数,计算出每克(或每ml)原始样品中所含细菌菌落总数。

基本操作一般包括:样品的稀释--倾注平皿--培养48小时--计数报告。

国内外菌落总数测定方法基本一致,从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同,只是在某些具体要求方面稍有差别,如有的国家在样品稀释和倾注培养进,对吸管内液体的流速,稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。

检验方法参见:

GB4789.2-2010 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》

食品中菌落总数的测定步骤主要为

菌落总数检测一般步骤为:

采样 — 样品制备与稀释 — 倒平板 — 涂布平板 — 倒置培养 — 菌落计数 — 计算菌落总数

样品制备,需要对样品进行均质,根据客户需要检测的样品不同。WIGGENS提供不同的均质设备,如均质机,拍打式均质器等;

样品的稀释,国标中采用1:10的十倍稀释方法,SOCOREX提供各种手动精密移液器,瓶口分液器,移液管控制器为液体操作提供了保证。

倒平板,使用的培养基为含有琼脂的固体培养基。培养基在配备的过程中需要经过煮沸和保温的步骤。WIGGENS红外加热磁力搅拌器,直接使用红外辐射方式进行加热,1L培养基只需要10分钟即可煮沸,极大节约了客户培养基制备时间。在倒平板之前,需要恒温培养基46±1 ℃, WIGGENS恒温水浴锅,可以为用户提供的温度控制和恒温条件;

涂布平板,培养基在培养皿中冷却成固态之后,将稀释后的样品用移液器取1mL,滴到培养基表面,用涂布棒涂匀。WIGGENS有专用的培养皿转盘,可以有效的将样品液均匀的涂布在培养基表面。

倒置培养,将涂布完毕的平板,放入恒温培养箱中进行培养,一般培养时间约为48h。WIGGENS恒温培养箱内容积50-140L各种规格的台式及落地式培养箱,先进的设计及数据接口,可以直接通过电脑编程控制及信息处理,非常适合规范化培养要求。

菌落数计算,经过48小时的培养之后,在培养基表面会长出菌斑,每个菌斑代表一个微生物。一般在培养皿中菌落数为30-300个之间,为有效菌落数。低于30个,会因为样本量不足,随机性大;超过300个,会因为菌落数太多,过于密集产生菌斑重叠等现象,不利于准确计数。WIGGENS菌落计数器,是带有非闪烁式环形光源,放大镜,压力传感器,计数笔等,可以让使用者轻松计数。

计算菌落总数,培养皿中的菌落数需要通过公式换算。 WIGGENS菌落计数器,配套软件可以直接通过压力传感器进行培养皿中菌落计数,通过软件内嵌程序直接计算出被检测样品中菌落总数。

检测食品化验菌落总数的实验步骤更原理

1 样品的稀释

固体和半固体样品:称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min~10000 r/min 均质 1 min~2 min,或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min~2 min,制成 1:10 的样品匀液。

液体样品:以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成 1:10 的样品匀液。

3 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成 1:100 的样品匀液。

4 制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用 1 次1 mL 无菌吸管或吸头。

5 根据对样品污染状况的估计,选择 2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行 10 倍递增稀释时,吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

6 及时将 15 mL~20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基(可放置于 46 ±1 ℃℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。

7培养 :待琼脂凝固后,将平板翻转,36 ±1 ℃℃培养48 h±2 h。水产品 30 ±1 ℃℃培养 72 h±3 h。 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约 4 mL),凝固后翻转平板, 条件进行培养。

8 菌落计数

可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌e68a847a686964616f31333330353564落计数以落

形成单位(colony-forming units,CFU)表示。

9 选取菌落数在 30 CFU~300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU的平板记录具体菌落数,大于 300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

10 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以代表一个平板菌落数。

11 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

如何评价食品中菌落总数的测定方法

食品中菌落总数的测定可依据现行国标《GB 4789.2-20缉胆光感叱啡癸拾含浆10 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》进行。具体内容可从附件下载。

标签: 菌落 总数 微生物